---

Панель генетических маркеров для прогнозирования развития сухого кератоконъюнктивита при ревматоидном артрите и болезни Шегрена.

Зайцева Г.В., Сафонова Т.Н., Бурденный А.М., Логинов В.И.

ФГБНУ "НИИ Глазных болезней", г. Москва, Россия, 2021 год.

По данным Dry Eye Workshop распространенность сухого кератоконъюнктивита (СКК) среди офтальмологических больных варьирует от 5-50%.

Почти в 30% случаев СКК является одним из офтальмологических проявлений РА и может определять степень его активности, так же является экспертным признаком постановки диагноза болезнь Шегрена (БШ), который констатируют у 80-90% пациентов (Zlatanović G., Veselinović D., et al.,  2010). СКК, ассоциированный с системными аутоиммунными заболеваниями (АИЗ), характеризуется наиболее тяжелым течением (Т.Н. Сафонова и соав., 2013).

В тоже время манифестация АИЗ может начаться с поражения органа зрения, ухудшая тем самым  качество жизни больных (Subbarayal B. et al., 2016, Daguano C. et al., 2011).

Доказана взаимосвязь развития БШ и РА с полиморфными маркерами генов тромбоспондин 1(THBS1), общий фактор транскрипции 2 I (GTF2I), муцин-1 (MUC1), содержащий трехчастный мотив 21 (TRIM21), сигнальный трансдуктор и активатор транскрипции 4 типа (STAT4), протеинтирозинфосфотаза 22 типа (PTPN22). (S. Raychaudhuri et al., 2013, JJ. Huang et al., 2012; MR. Spalinger et al., 2016; K. Mehla et al., 2014). Однако ассоциативной связи полиморфных маркеров с повреждением глазной поверхности при данных АИЗ установлено не было.

Изучение генетических основ СКК при АИЗ позволит дополнить диагностический алгоритм и стать основанием для разработки генно-инженерной терапии этих заболеваний.

В связи с этим целью исследования стало создание панели генетических маркеров для диагностики сухого кератоконъюнктивита при ревматоидном артрите и болезни Шегрена.

В исследование было включено 154 пациента с верифицированным диагнозом АИЗ 75 с БШ и 79 с РА, группа контроля состояла из 100 добровольца без отягощенной наследственности.

Для подтверждения результатов ассоциации полиморфных маркеров в генах использовали метод анализа кривых плавления ДНК. Для этого всем группам был проведен забор венозной крови и проведение генетического исследования

Для более детального изучения морфологического состояния роговицы и конъюнктивы проводили дополнительные методы исследования, включающие лазерную сканирующую конфокальную микроскопию роговицы и ИЦИ конъюнктивы.

У пациентов с СКК на фоне БШ ход и структура НВР были нарушены, отмечена выраженная извитость, снижение количества.

У пациентов без СКК ход и структура НВР были в пределах нормальных значений. По результатам ИЦИ конъюнктивы пациентов с СКК на фоне БШ выявлена микровезикуляция цитоплазмы, бесклеточные зоны, расширение межклеточных границ, «прообраз бокаловидных клеток», умеренная лейкоцитарная инфильтрация.

У пациентов без СКК определялась относительно нормальная архитектоника эпителия конъюнктивы со снижением плотности бокаловидных клеток.

У пациентов с СКК на фоне РА на сканограммах HRT наблюдали извитость, разнонаправленность, «чёткообразность», уменьшение количества НВР. У пациентов без СКК НВР были так же извиты, разнонаправлены, местами «чёткообразные», но их количество не изменено. 

У пациентов с СКК при ИЦИ конъюнктивы выявлен клеточный полиморфизм, нечеткие границы ядер, гомогенезированная отечная цитоплазма. Практически полное отсутствие бокаловидных клеток. У пациентов без СКК обнаружено снижение и неравномерное распределение бокаловидных клеток.

С высокой степенью достоверности была доказана ассоциация полиморфного маркера rs4144331 гена TRIM21 с риском развития СКК на фоне БШ и самого синдрома.

Так же с высокой степенью достоверности была доказана ассоциация полиморфных маркеров rs915956, rs7947461, rs4144331 гена TRIM21 с риском развития РА.

И при сравнении пациентов этой группы между собой с высокой степенью достоверности была доказана ассоциация данных маркеров гена TRIM21 с риском развития СКК на фоне РА.

Для полиморфного маркера rs4072037 гена MUC1 связи с риском развития СКК на фоне РА и БШ не установлено.

Но установлена высокая корреляция генотипа AG с изменениями эпителия конъюнктивы по типу «сухого» глаза, соответствующими стадиям суб- и декомпенсации СКК.

При этом между функциональными показателями Проба Норна, тест Ширмера и генотипами AG и GG, выявлена умеренная корреляция.

Для полиморфного маркера rs1478604 гена THBS1 с высокой степенью достоверности установлена ассоциация с риском развития БШ Известно, что ген THBS1 участвует в развитии и восстановлении НВР, исходя из этого нам удалось установить взаимосвязь средних значений коэффициента анизотропии (KΔL) и симметричности направленности (Ksym) НВР с генотипами полиморфных маркеров rs1478604 и rs2228262 гена THBS1.

Установлена взаимосвязь предрасполагающих генотипов GG маркеров rs1478604 и rs2228262 со степенью тяжести СКК, а также изменением хода и структуры НВР.

Для полиморфного маркера rs7582694 гена STAT4 установлена достоверная ассоциация с риском развития БШ. При анализе распределения частот генотипов полиморфных маркеров гена PTPN22 установлена достоверная ассоциация с риском развития БШ. А для маркера rs33996649с риском развития СКК.

Причем в основном предрасполагающий генотип ТТ встречался только в группе пациентов с БШ.

Для предрасполагающего генотипа ТТ полиморфного маркера rs117026326 гена GTF2I выявлена ассоциация с риском развития СКК на уровне тенденции.

Таким образом, удалось создать диагностическую панель генетических маркеров.

В таблице (смотри слайды) приведен перечень полиморфизмов генов, которую мы применяем в практике, красным отмечен предрасполагающий генотип, так называемая мутантная гомозигота.

Чем больше в профиле пациента определяется таких генотипов по указанным генам, тем выше вероятность развития СКК.

---

Материал для публикации на офтальмологическом портале Орган зрения любезно предоставили Зайцева Галина Валерьевна и Сафонова Татьяна Николаевна.